第一部分舒脉胶囊对载脂蛋白基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块及斑块内血管新生的影响

前言

众所周知，动脉粥样硬化疾病的发生发展对人类的健康产生了严重的危害，因为由其所导致的心脑血管疾病的发病率呈逐年上升的趋势，并且发病越来越年轻化。由于导致临床事件的不同，动脉粥样硬化斑块目前多分为两类：一类是稳定型即纤维帽厚而脂质池较小的斑块，而另一类是不稳定型又称易损型斑块。“易损斑块”的概念于年由等人提出，所谓易损斑块即包括所有具有血栓倾向的斑块，这种斑块发展迅速、很可能成为“罪犯斑块”。进一步的研究表明了易损斑块的特点，易损斑块多具有脂质中心大、纤维帽薄、平滑肌细胞和胶原含量少、炎症细胞和炎症介质水平较高等等特点。易损斑块产生了严重的危害，因其易损性而容易破裂，破裂后形成血栓，造成血管腔阻塞，导致急性心血管事件急性冠脉综合征，的发生。因此，如何有效稳定斑块，从而防止斑块破裂，是目前防治心血管急性事件研究方面的热点。

材料与方法

分别在用药前及实验结束时对所有实验鼠进行体重称量，每只称量3次取均值，由同一人操作并负责记录。药物干预12周末实验结束时用过量戊巴比妥钠腹腔注射使小鼠安乐死后，穿刺心脏采血，常温静置30分钟后，3000转离心15分钟，取上层血清。德国日立全自动生化分析仪检测血清总胆固醇、甘油三酯低密度脂蛋白胆固醇水平。小鼠处死后迅速打开胸腔，左心室逆行灌注液体至主动脉，钝性分离主动脉，主动脉根部置于4%多聚甲醒浸泡溶液中固定，备做病理标本；其余主动脉部分-80°保存，待做分子生物学检测。

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第二部分舒脉胶囊干预载脂蛋白基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的机理研究

前言

动脉粥样硬化是临床急性心血管事件的重要病因。研究发现，血管新生和动脉粥样硬化斑块进展密切相关。血管新生的发生机制非常复杂，迄今并没有完全明了，其发生发展受到两方面因素的共同调控：促进血管生成因子和抑制血管生成因子。血管内皮生长因子是目前为止所发现的最关键的血管生成促进因子，特异性作用于血管内皮细胞，诱导血管内皮细胞向血管壁内膜下迁移并增生，同时增加血管壁通透性，在生理状态及病理状态下血管新生过程中发挥着重要作用。许多实验表明，在斑块富含新生血管的区域有的高表达，并且，的高表达先于动脉粥样硬化新生血管的发生。通过结合其受体发挥作用，目前发现有三种受体，新生血管内皮细胞的增殖及所诱导的粘附分子表达和血管通透性的增加，主要通过这一重要受体实现。

材料与方法

配制10%分离胶后配制成5%层胶，插入梳子。胶聚合后，将检测蛋白加入梳子孔中，在检测蛋白旁的孔中加入蛋白Marker。稳压80v电泳，待溴酌蓝进入分离胶后稳压120v进行电泳，直至溴紛蓝到达分离胶的底部后停止电泳。取转膜槽，在阴极内面铺转膜缓冲液浸湿的纤维垫，其上放置层滤纸，排净气泡。将切好的电泳凝胶用转膜缓冲液浸泡后置于盒内滤纸上。在凝胶上铺膜。在膜上再放层滤纸，排净气泡。放上第二层纤维垫，关上转移盒，放入转移缓冲槽中，槽中加满转膜缓冲液。稳压100v，冰浴中转膜60min。

第一部分舒脉胶囊对载脂蛋白基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块及斑块内血管新生的影响..................1

前言......................10

材料与方法.............11

第二部分舒脉胶囊干预载脂蛋白基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的机理研究....................................52

前言.......................62

材料与方法................63

结果与讨论..................71

结论.....................86

结果与讨论

可选择性增强血管内皮细胞的有丝分裂，促进内皮细胞的生长和血管在三维空间上的形成。在维持内皮细胞正常功能中发挥重要作用，是内皮细胞存活因子并可抑制内皮细胞调亡。有研究发现，仅仅—个等位基因的缺失，可导致小鼠胚胎没有生成内皮细胞而在天死亡。还可促进血管内皮细胞核血管外周细胞之间的相互作用，而血管外周细胞聚集于血管内皮细胞可导致血管内皮细胞成熟，从而促进新生血管生成。增加血管通透性，尤其是增加微小血管通透性，其活性是组胺的倍。毛细血管通透性的增加是血管形成的前提基础，通过的作用，可以导致毛细血管小静脉和后静脉血楽蛋白的向外渗漏，血浆蛋白形成纤维蛋白原，凝集于血管外基质并形成纤维蛋白，血管内皮细胞在外渗的纤维蛋白所构成的支架的支持下，向血管内增殖和迁移，促进新生血管的发生，并且外渗的纤维蛋白为新生毛细血管网的建立提供了营养。改变细胞外基质。大量物质，包括血楽纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物抑制剂及基质胶原酶等表达于血管内皮细胞后可改变细胞外基质，而可诱导这些物质在血管内皮细胞表达，细胞外基质改变后可促进血管成长发生。导致血管扩张。在血管内皮细胞受到刺激同时，还可增强内皮细胞源性一氧化氮合成酶活性，进一步促进一氧化氮合成，是扩血管性物质，可以导致血管扩张，造成新生血管重塑，而在这一过程中发挥了重要作用。造血效应。可诱导粒单核系祖细胞成熟并形成集落，增强单核趋化能力，在辖射损伤后，缺乏会导致造血干细胞和骨髓单核细胞的再生出现障碍，并使造血过程中造血干细胞的存活发生障碍。

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结论

大量研究已证实，动脉粥样硬化其机制正包括促进斑块内局部炎性浸润和血管新生。家族及其受体是斑块内新生血管的重要介导因子，其促进血管形成活性主要通过血管内皮细胞特异性表达的高亲和力的跨膜受体起作用，且通过信号通路来完成，这和肿瘤中小血管的形成促进肿瘤生长的情形类似，对动脉粥样不稳定斑块的形成起着关键性的作用。等研究发现，的增加促进了斑块内新生血管的形成，新生血管和炎症因子互相促进，在新生血管形成过程中，细胞粘附分子等产生增加，促进炎性因子粘附于血管壁，炎性因子又增加了毛细血管的通透性，进而加重动脉粥样硬化，形成恶性循环。等研究结果显示，心肌移植后移植物所处微环境中，血管壁内和其他细胞因子共同促进了斑块的形成。的研究亦表明，在的发生中起了关键作用，因为可增加血管通透性。舒脉胶囊抑制斑块内血管新生，稳定斑块的机制和影响、及及蛋白水平的表达有关。

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参考文献（略）